Humoral immune alterations caused by lead: studies on an adult toad model

There is evidence that environmentalmetal levels affect the immune function. In the particular case of the impact of heavy metals, information available suggests that the immune system is a target for low-dose Pb exposure. Among vertebrates it was shown that amphibians are capable of forming antibodies against a variety of antigens, causing several responses such as anaphylactic response and rejectinggrafts. In this study, the production of antibodies was assessed against sheep red blood cells (SRBC) in the anuran Bufo arenarum after six weekly injections of sublethal doses of lead (50 mg.kg-1, as lead acetate). Natural antibodies (natural heteroagglutinins)were also quantified against SRBC. Both assessments were carried out employing an ELISA method developedto this end, measuring absorbance (A). For natural anti-SRBC antibodies in both control (C) and Pb treated (T) toads, there was a non significant tendency to increase the initial absorbances (C initial: 0.69+0.39 A; T initial: 0.54+0.30 A), relative to those registered at the end of the experiments (C final: 0.89+0.49 A; T final: 0.76+0.31A); the T/C ratios also did not show changes. The only significant difference was found between initial and final samples from lead-treated toads (p<0.014). The immune anti-SRBC antibody levels of toads immunized with SRBC showed a significant lower increase (p<0.05) in lead-treated animals (T final: 0.66+0.36 A), as compared to control toads (C final: 0.91+0.50 A) at the end of the experiment. It was thus concluded thatthe changes due to the assayed doses of Pb in the levels of antibodies cannot be explained on the basis of only one singleaction mechanism of the metal, but as the result of a conjunction of effects over different immunocompetent cell subpopulations. These different responses suggest that factors affecting animals exposed to a foreign stimulus are different from those influencing the response of wild animals.

Existe evidencia de que los niveles de metal ambientales afectan la función inmune. En el caso particular del impacto de metales pesados, la información disponible sugiere que el sistema inmune es un blanco para la exposición a bajas dosis de Pb. Entre los vertebrados, se ha mostrado que los anfibios son capaces de formar anticuerpos contra una variedad de antígenos, que causan diversasrespuestas, tales como respuesta anafiláctica y rechazo de injertos. En este estudio, la producción de anticuerpos fue evaluada contra eritrocitos de oveja (EO) en el anuro Bufo arenarum, luego de seis inyecciones semanales de dosis subletales de plomo (50 mg.kg-1, como acetato de Pb). Los anticuerpos naturales (heteroaglutininas naturales) fueron también cuantificados contra EO. Ambas evaluaciones fueron llevadas a cabo empleando un método de ELISA desarrollado a este fin, midiendo laabsorbancia (A). Para los anticuerpos anti-EO naturales, tanto en sapos controles (C) como en sapos tratados con Pb (T), hubo una tendencia significativa a incrementar las absorbancias iniciales (C inicial: 0,69+0,39 A; T inicial: 0,54+0,30 A); la relación T/C tampoco mostró cambios. La única diferencia significativa se encontró entre las muestras inicial y final de los sapos tratados con plomo (p<0,014). Los niveles de anticuerpos anti-EO inmune de sapos inmunizados con EO mostraron un bajo incrementosignificativo (p<0,05) en los animales tratados con plomo (T final: 0,66+0,36 A), al compararse con sapos control (C final: 0,91+0,50 A) al final del experimento. De este modo, se concluye que los cambios debidos a las dosis analizadas de Pb en los niveles de anticuerpos no pueden explicarse sólo sobre la base de un único mecanismo de acción del metal, sino como resultadode una conjunción de efectos sobre diferentes subpoblaciones de células inmunocompetentes. Estas diferentes respuestas sugieren que los factores que afectan los animales expuestos a un estimulo externo son diferentes...

Evaluación externa de calidad en Hematología: determinación de hierro sérico / External quality evaluation in hematology: determination of serum iron

El objetivo de este trabajo fue evaluar el desempeño analítico de los laboratorios del Programa de Evaluación Externa de Calidad de la Fundación Bioquímica Argentina, Subprograma Hematología (PEEC-H), para la determinación de hierro sérico según los resultados de 8 encuestas. Se observó un aumento promedio de 6 por ciento en los niveles de aceptación, con respecto a las dos encuestas iniciales y en relación a los que responden, que se mantuvo en las encuestas restantes. Constrastando los métodos con y sin desproteinización para dos reactivos cromogénicos empleados (ferene y ferrozina), de la comparación de sus respectivas medias y varianzas mediante test t y ANOVA, se concluye que no hay diferencias significativas (p>0,05) entre ambas condiciones. En el PEEC-H, para el analito hierro, el desvío porcentual relativo aceptable (DPRA) es de ± 10 por ciento. Entre 30-45 por ciento de los laboratorios tienen un desempeño aceptable que cae dentro del DPRA. Según estas consideraciones, es necesario hacer una revisión del DPRA para el analito hierro empleado en el PEEC-H. Asismismo, del análisis de los resultados surge que se requiere continuar con la Educación Continua para lograr una mayor estandarización en la metodología empleada, que redundará en una mejoría en el desempeño de los laboratorios

Evaluación del desempeño de contadores hematológicos / Performance assessment of blood cells analyzers

El objetivo de esta presentación es brindar, en forma didáctica y actualizada, una orientación para la evaluación de contadores hematológicos. Primeramente se hace referencia a los niveles de evaluación, la información preliminar referida al instrumento sobre requerimientos de espacio y servicios y al manual de instrucción. En cuanto a las etapas de evaluación se tratan: a) la planificación técnica que incluye acuerdos previos con el fabricante y la planificación de recursos internos; b) calibración, calibradores y materiales de control; c) reactivos; d) muestras: su manipulación y registros de datos; e) ensayo preliminar: normas de seguridad (mecánicas, eléctricas, microbiológicas, químicas, ambientales) e instalación y mantenimiento; f) evaluación del desempeño: efecto de la dilución, coincidencia, precisión intra e interensayo, deriva, evaluación del arrastre, comparabilidad con datos obtenidos por procedimientos de rutina, exactitud, efecto del envejecimiento de la muestra, sensibilidad para muestras anormales, interferencias, análisis de datos y utilidad clínica; g) evaluación de la eficiencia. Finalmente, se sacan conclusiones sobre la base de un ejemplo de evaluación de un equipo de apertura-impedancia

Intervalos de referencia: metodología para su creación y verificación / Reference intervals: a methodology for their creation and verification

Cuando se lleva a cabo la interpretación de un dato de laboratorio clínico, necesariamente se debe tomar una decisión por comparación del dato medido u observado de un individuo, con relación a un intervalo de referencia (IR) confiable. Así, éstos IR constituyen el medio más frecuente para determinar si un valor observado sugiere la presencia de enfermedad. De no ser posible determinar un IR, dado que pueden existir limitaciones, se cuenta una alternativa válida, de fácil implementación, que no requiere de grandes recursos extras y que, por lo tanto, está al alcance de todos los laboratorios clínicos: la verificación de los IR. Con el objetivo de difundir y hacer más accesible el uso de IR determinados o verificados localmente, se revisan conceptos, definiciones y metodologías para la creación y verificación de IR. Además, se lleva a cabo el cálculo con dos ejemplos, uno (hemoglobina, Hb) en donde fue posible verificar el IR (IR verificado de 120 a 146 g/l para un IR seleccionado de 120-150 g/l) y otro (ferritina) donde ésto no ocurre (IR obtenido de 3,3-148,7 µg/l para un IR aportado por el fabricante de 6-81 µg/l

Galectinas: estructura, especificidad glicídica y ligandos específicos / Galectins: structure, sugar specificity and specific ligands

Las galectinas se definen por dos propiedades: secuencias de aminoácidos características compartidas y afinidad por azúcares ß-galactosídicos. Numerosas galactinas de mamíferos fueron secuenciadas y bien caracterizadas en diferentes especies, siendo clasificadas como galectina-1 a galectina-10, según sus homologías de secuencia. La identidad entre dominios que ligan carbohidratos de distintas galectinas de una especie de mamífero oscila entre 20-40 por ciento, mientras que la identidad de galectina-1, por ejemplo, entre distintas especies es de 80-90 por ciento. En la presente revisión, se describen las principales propiedades distintivas de las galectinas de mamífero en cuanto a estructura proteica, estructura cristalina, especificidad glicídica y ligandos específicos

Evaluation and additional recomendations for preparing a whole blood control material

Avaliar material de controle para hematologia, de fácil preparaçäo e baixo custo, que poderá ser usado por métodos manuais, e automatizados. Alíquotas de sangue estabilizado foram preparadas por fixaçäo parcial com aldeídeos. Foram estudadas a estabilidade a diferentes temperaturas (4, 20, 37§C) durante períodos de até 8-9 semanas e a variabilidade das alíquotas para ambos os métodos. A variabilidade entre alíquotas, expressada em CV por cento (coeficiente de variaçäo) com métodos automatizados no primeiro dia, foi: glóbulos brancos (WBC) 2,7, glóbulos vermelhos (RBC) 0,7, hemoglobina (Hb) 0,6, hematócrito (Hct) 0,7, volume corpuscular médio (MCV) 0,3, Hb corpuscular médio (MCH) 0,3, concentraçäo de Hb corpuscular médio (MCHC) 0,7 e plaquetas (Plt) 4,6. O CV por cento obtido com métodos manuais para um dos grupos foi: WCB 23, Hct 2,8, Hb 4,5, MCHC 5,9, Plt 41. As amostras conservadas a 4 e 20§ C foram estáveis, observando-se leve hemólise inicial, enquanto que as amostras conservadas a 37§ mostraram uma rápida decomposiçäo (formaçäo de metaemoglobina, agregaçäo de glóbulos brancos e plaquetas e alteraçöes de índices). Confirmou-se que, se näo houver exposiçäo, este material é estável, permitindo avaliaçäo, tanto externa como interna para controle e com reprodutividade aceitável, tanto para métodos manuais como automáticos

Delta-aminolevulinic acid dehydratase (ALAD) activity in blood of Bufo arenarum (Anura)

The aim of the present investigation was to standardize a method for measuring delta-aminolevulinic acid dehydratase (ALAD) activity in circulating red blood cells of adult Bufo arenarum kept in controlled environmental conditions, and to obtain reference basal values suitable for environmental monitoring of lead exposure. The normal ALAD activity for B. arenarum was 131.86 + 14.47 U per liter of red blood cells (n = 38, mean + SEM; interval 72.98 - 263.33). In animals exposed to lead, ALAD activity decreased as lead dose increased.

Evaluacion externa de la calidad analitica en hematologia: una necesidad en America Latina / External evaluation on the analytical quality of hematology: a need in Latin America

The assurance of analytical quality in a clinical laboratory is achieved through an internal system of quality control complemented by an external evaluation program. Quality assurance provides a foundation for the confidence that is placed in laboratory results and their use in the diagnosis and treatment of diseases. Many laboratories in Latin American countries do not have appropriate systems in place to evaluate and control quality. Given the importance of diagnoses based on hematologic data, the Pan American Health Organization sponsored a course in quality control in hematology during the XI Latin American Congress of Clinical Biochemistry (Mexico, 1993), in which representatives from Argentina, Chile, Cuba, Mexico, Paraguay, Dominican Republic, and Uruguay participated. As part of the course, the following control materials were produced: secondary standard solution of cyanmethemoglobin, stabilized concentrated hemoglobin solution, and preserved human whole blood with pseudoleukocytes. These materials were sent to laboratories in the seven participating countries for use in analytical procedures, and the results were then subjected to an external evaluation to assess individual performance and the comparability of results among the group. The specific tasks carried out were: (1) determination of values for hemoglobin, hematocrit, and red and white blood cell counts by the procedures normally used in each laboratory; (2) recording of the data on special reporting forms; and (3) transmittal of those forms to the coordinator in each country. The results were analyzed with regard to both the procedure used and the participating country. Reference values were established by consensus following application of a statistical method to eliminate outlying values. Comparative analysis of the results showed the coefficients of variation (CV) of the hematocrit (4.5%), red blood cell count (11.0%), and white blood cell count (22.2%) to be higher than those reported from the United States of America and Europe. With regard to analytical procedures, the manual methods yielded larger CV than the automated methods. When analysis of variance (ANOVA) was used on data broken down by country and by procedure, the only statistically significant result was for leukocyte count (P < 0.02). It was concluded that training in the preparation of quality control materials and the subsequent use of these materials in pilot surveys could provide a starting point for establishing continuous internal and external quality assessment systems in hematology. Such systems, together with continuing education for laboratory personnel and the availablity of automated instrumentation, will lead to achievement of optimum laboratory quality.

La garantía de calidad analítica de un laboratorio clínico se logra mediante un sistema de control de calidad interno complementado por un programa de evaluación externa. Esa garantía es la base que fundamenta la confiabilidad de los resultados obtenidos por los laboratorios y su uso en el diagnóstico y tratamiento de las enfermedades. En los países de América Latina hay muchos laboratorios que no cuentan con sistemas apropiados de evaluación y control de la calidad. Dada la importancia de los diagnósticos basados en datos hematológicos, durante el XI Congreso Latinoamericano de Bioquímica Clínica (México, 1993) la Organización Panamericana de la Salud patrocinó un curso de control de la calidad en hematología en el que participaron Argentina, Chile, Cuba, México, Paraguay, República Dominicana y Uruguay. Como parte del curso se produjeron materiales de control: solución estándar secundario de cianmetahemoglobina (HICN), solución concentrada estabilizada de hemoglobina (Hb) y sangre entera humana preservada con seudoleucocitos. Estos materiales fueron enviados a laboratorios de los siete países participantes para su uso en procedimientos analíticos, con objeto de llevar a cabo posteriormente una evaluación externa del desempeño individual y de la comparabilidad de los resultados en conjunto. Las tareas asignadas fueron: 1) determinación de hemoglobina, hematocrito, y glóbulos rojos y blancos con los métodos en uso en cada laboratorio; 2) registro de los datos obtenidos en formularios especiales para la notificación de datos y 3) envío de dichos formularios al coordinador de cada país. Los resultados fueron analizados en función de los procedimientos analíticos y de los países participantes. Los valores de referencia se establecieron por consenso general de todos los participantes después de someterse al método estadístico de truncamiento. El análisis comparado de los resultados mostró coeficientes de variación (CV) de hematocrito (4,5%), recuento de glóbulos rojos (11,0%) y recuento de glóbulos blancos (22,2%) más altos que los coeficientes obtenidos en los Estados Unidos de América y Europa. En función del procedimiento analítico, los métodos manuales arrojaron CV mayores que los métodos automatizados. Los datos discriminados por país y por procedimiento analítico, sometidos a un análisis de la varianza (ANOVA), mostraron significación estadística solo para el recuento leucocitario (P < 0,02). Se concluye que el adiestramiento en la preparación de materiales de control de calidad y su utilización posterior en encuestas piloto puede constituir la base inicial para establecer sistemas permanentes de evaluación interna y externa de la calidad en hematología que, junto con la educación continua del personal y la disponibilidad de instrumental automatizado, permitan alcanzar el objetivo de calidad óptima en el laboratorio.

Further studies on vertebrate S-type lectins: cross-reactivity between toad and human lectins

Galectins (S-type or S-Lac lectins) are a well-defined family of beta-galactoside animal lectins characterized by a high sequence homology in the carbohydrate-binding domain. We have previously purified and characterized the S-type lectin from the ovary of the toad Bufo arenarum. In this study, we purified the S-type lectins from Bufo arenarum ovary and human spleen by an improved method which included ion exchange and affinity chromatography. Antibody cross-reactivities between both lectins and some other S-type lectins showed that they share epitopes. Glycosylation studies carried out with detection/differentiation kits suggested that both lectins are not glycosylated

Lectinas solubles beta-galactosídicas / Beta-galactoside solubles lectins

Sobre la base de estudios estructurales y funcionales, las lectinas animales se han clasificado en dos tipos: el Tipo C, caracterizado por su dependencia de los iones de calcio y el Tipo S que no es calciodependiente, sino tioldependiente. Entre estas últimas, se ha estudiado ampliamente el grupo de lectinas S-Lac, que son extraídas con buffers salinos con lactosa, en presencia de tioles. Contituyen una familia de proteínas realcionadas estructuralmente, que contienen una serie de aminoácidos conservados. Se unen específicamente a glicoconjugados complementarios y su biosíntesis y localización son reguladas por el desarrolo. Su rol puede relacionarse con diversas actividades biológicas que poderían variar según el órgano.

Evaluación de una solución estándar secundario de cianmetahemoglobina / Assessment of a secondary standard solution of hemoglobincyanide

Con el objeto de mejorar la calidad de las determinaciones de hemoglobina, se preparó una solución estándar secundario de cianmetahemoglobina (HiCN), de acuerdo con el método recomendado por el Comité Internacional de Estandarización en Hematología (ICSH). En los dos lotes preparados (2001 y 2002) se cumplimentaron los requisitos de límites de concentración de HiCN (550-850 mg/l) y de pureza, basados en: a) forma del espectro de absorción entre 450-750 nm, b) índice A540 nm/A504 nm de 1,59-1,63 y c) límite de turbidez medido a 750 nm (Abs < 0,002/cm) descriptos enla publicación ICSH EP6/3:1977. La solución final se fraccionó como solución estéril por membranas filtrantes, en ampollas de 10 ml de vidrio color caramelo. Asimismo se procedió a hacer controles de esterilidad en medios para anaerobios y aerobios, obteniéndose resultados satisfactorios. Las concentraciones de cianmetahemoglobina fueron comparadas con una solución estándar de referencia internacional provista por la Organización Mundial de la Salud (OMS) (Lote 70600). Además, ambos lotes fueron evaluados en forma simultánea en el laboratorio del External Quality Assessment Scheme, Departament of Haematology Postgraduate School of Medicine de Londres, Inglaterra, estando los datos dentro de los valores aceptables. Asimismo se evaluó la estabilidad en el tiempo, observándose que en uno de los lotes recién al cabo de 54 meses los valores se alejaron de los límites permitidos. Por otra parte se procedió a distribuir este material (Lote 2002) en dos encuestas del Programa de Evaluación Externa de Calidad de la Federación Bioquímica de la Provincia de Buenos Aires, entre aproximadamente 1.000-1.300 laboratorios con porcentajes de respuesta entre 45-64 por ciento. Los datos de consenso, que se obtienen por truncamiento iterado en ñ 3 DE hasta que no queden valores fuera de dichos límites, fueron los siguientes: Encuesta Nº10 Hb (X ñ DE) 158 g/l ñ 18,9; CV por ciento 11,9. Encuesta Nº13 Hb (X ñ DE) 153 ñ 12,3 g/l; CV por ciento 8,0. Los valores de consenso se compararon con los datos asignados por la Cátreda, encontrándose diferencias entre -1,2 por ciento y -5,1 por ciento respectivamente

Evaluación externa de calidad en hematología: hemoglobina (período 1989-1991) / External quality assessment in hematology: hemoglobin (1989-1991)

Se exponen los resultados obtenidos en el Programa de Evaluación Externa de Calidad (PEEC) en Hematología de la Federación Bioquímica de la provincia de Buenos Aires, durante el período 1989-1991. Este Programa está inserto en el Programa de Evaluación Externa de Calidad en Bioquímica Clínica. El mismo es de carácter voluntario, explícito o anónimo. Inicialmente fueron 911 los inscriptos, y en la actualidad han superado los 1300, incluyendo laboratorios de otras provincias. En esta etapa sólo se ha implementado la evaluación externa para la hemoglobinometría. Se llevaron a cabo ocho encuestas, una de ellas a dos niveles de concentración, observándose que los porcentajes de respuestas aceptados, es decir que caen dentro de Xñ3 DE, oscilan entre 31-95%, con coeficiente de variación (CV) entre 5.8-14.2%. Los porcentajes de laboratorios que se encuentran dentro del límite de aceptabilidad de ñ5% varían entre 22-51%. El envío simultáneo de muestras a dos niveles arrojó diferencias para ambos valores asignados de -10% y -13.5%, lo que indica presencia de un error sistemático. El grado de estandirización logrado está relacionado con el empleo mayoritario de espectrofotómetros de haz simple, del uso de un solo punto de calibración y, como factor más crítico aún, de la existencia de 7-8% de laboratorios que aún no han adoptado el método recomendado de cianmetahemaglobina, todo lo cual justifica ampliamente la continuidad del PEEC